談談淋巴細胞分離液使用操作步驟具體是什么?
淋巴細胞分離液主要用于分離人外周血淋巴細胞的分離,也適用于大多數(shù)哺乳動物單個核細胞的分離。具有低毒、高得率、高純度等特點。
1、取新鮮抗凝全血或者去纖維蛋白血液,用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。
2、在離心管中加入適量分離液,將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方,注意保持兩液面界面清晰。
3、室溫,水平轉子500~1000g,離心20~30min。
4、離心后將出現(xiàn)明顯的分層:上層是稀釋的血漿層,中間是透明的分離液層,血漿與分離液之間的白膜層即為淋巴細胞層,離心管底部是紅細胞與粒細胞。
5、小心的吸取白膜層細胞到15mL潔凈的離心管中, 10mL PBS或細胞洗滌液洗滌白膜層細胞。250g,離心10min。
6、棄上清,5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞,250g,離心10min。
7、重復步驟6;